跨膜細胞電阻儀是一種用于測量細胞層電阻的儀器,廣泛應用于研究細胞間的緊密連接和屏障功能。在實驗過程中,正確操作跨膜細胞電阻儀并注意相關事項至關重要。
一、操作步驟
1.準備實驗材料:跨膜細胞電阻儀、細胞培養器、細胞培養基、胰酶、離心管、移液器等。
2.細胞培養:將細胞種植在細胞培養器上,加入適量的細胞培養基。將培養器放入37℃、5%CO2的培養箱內培養,直至細胞達到適當的傳代比例。
3.裝載細胞:將細胞懸液用胰酶消化后,計數并調整細胞濃度。將一定數量的細胞懸液加入到儀器的上室和下室中,確保細胞能夠覆蓋整個膜表面。
4.測量電阻:將儀器接入恒溫水浴槽,保持溫度在37℃。使用移液器輕輕攪拌下室中的細胞懸液,以消除濃度極化現象。記錄初始電阻值。
5.數據分析:在一定時間內監測并記錄電阻值的變化,計算電阻的相對增減率。分析數據,評估細胞層的緊密連接和屏障功能。
二、注意事項
1.選擇合適的細胞株:不同類型的細胞株具有不同的生理功能和特性,因此在實驗前需充分了解所選細胞株的特性,以確保實驗結果的準確性。
2.維持適宜的培養條件:細胞的生長和分化受到諸多因素的影響,如溫度、濕度、pH值等。在實驗過程中,應嚴格控制這些條件,以保證細胞的正常生長。
3.避免污染:細胞培養過程中容易受到細菌、真菌等微生物的污染。因此,在操作過程中應嚴格遵守無菌操作規程,定期更換手套,并對實驗器皿進行消毒。
4.確保儀器的準確性:在使用前,應檢查儀器是否工作正常,測量電極是否潔凈。測量過程中,應避免電極與細胞或細胞培養基直接接觸,以免影響測量結果。
5.實驗結果的可靠性:實驗數據的準確性受多種因素影響,如操作誤差、測量時間、細胞密度等。因此,在實驗過程中應盡量減少誤差,重復測量并取平均值,以提高實驗結果的可靠性。